承诺：

第一：我们尽全力提供绝对准确的细胞。

第二：我们尽全力确保收货的时候符合正常的细胞特性状态。

第三：无论是否购买我们的细胞都提供技术交流（客户配合）。

第四：常规细胞产品一个月无责售后补发一次。

壹．收货指南（重要）

1）收货前根据说明书培养条件，提前准备细胞培养所需材料。

2） 收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

3） 收货后没有外观损坏的情况下用 75%酒精消毒后将 T25 瓶置于 37℃培养箱放置约 2-3h 等待细胞稳定。

4） 细胞稳定后在显微镜下确认细胞生长状态，判断细胞的密度并清晰拍照 1 0 0 倍 2 0 0 倍照片最少 1张记录反馈细胞状态以防出现售后作为证据，没有照片反馈默认接受细胞质量没有问题。

备注：运输用的培养基（灌液培养基）注意是否可以用来培养细胞，如果是运输低营养培养基则换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养。当密度达到 80%左右， 传代比例前几次建议按照 1:2 传代，传代后一个倍增周期后可以长成 2 瓶 80%左右密度的细胞时，冻存其中一瓶成 1 个 1ml 的冻存管当种子细胞保存，另外一份长满的细胞继续 1:2 传代，反复操作后冻存细胞种子大约 3 个以上。 后续根据细胞倍增效率和密度可以适当扩大传代比例做实验。

传代比例：

1 个 T25 瓶传 2 个 T25 瓶       = 1:2。

1 个 T25 瓶传 1个 10cm 的培养皿 = 1:2.4

贰：售后说明。

承诺四项完成后如有要求再次补发收取费用50%再次补发每次，如果是我们品牌的原因无法达到常规水平也没有能力解决问题的情况下，仅对本产品本身退单处理，其他要求我们无法满足。

叁．细胞复苏、传代与冻存操作流程

冻存液：90%FBS 或者完全培养基+10% DMSO  或者使用成品正规厂家无血清冻存液均可

冻存发货常规常见的细胞，冻存管 2 支（一支为赠送）(特殊除外，比如一些有限细胞系或者特殊情况)。我们建议客户先复苏 1 支，存活的话第二支当种子保存，第一支如果没有存活，第一时间反馈细胞复苏的详细信息给我们，再严格按照我们的要求复苏第二支。

操作流程：

复苏

1)  将恒温水浴锅中的水预热到37℃;

2)  准备一支 15ml 离心管，加入 5ml 含 10% FBS 的完全培养基，放入 37℃水浴锅中预热；

3)  戴上护目镜，厚毛线手套后，从液氮罐中取出要复苏的细胞，尽快转入 37℃恒温水浴锅中复温晃动冻存管以提高复温速率；

4)  将融化了的冻存管中的细胞吸入事先准备的离心管中，混匀后，1000 rpm 离心 5min；

5)  准备一个 T-25 培养瓶，写上细胞名称、 日期，再加入 5 - 8 ml 完全培养基；

6) 离心完成后弃去上清，用 1ml 完全培养基重悬细胞后，转入 T-25 细胞培养中，混匀后转入CO2 培养箱中培养静置。

注意：从液氮中取出细胞冻存管时，若冻存管内有液氮进入，需排出内部残留的液氮，置于干冰上，然后放入 37℃水浴中，避免温差太大造成液氮快速气化而爆炸。

传代   （细胞传代建议一传二）

贴壁细胞：

1)   当细胞汇合度达到 80%-90%时，可进行传代（特殊细胞除外）。

2)  在生物安全柜内，打开培养瓶瓶口，收集瓶内的培养基；

3)   向培养瓶内加入 3ml 无菌的 1×PBS  后，水平放置培养瓶，使 PBS 能够浸润到培养瓶底面上所有的面积，吸弃 PBS ，对于分泌物比较多的细胞可以重复 2-3 次。也可以轻轻的润洗；

4)   向瓶内加入消化液 1ml ，浸润底面后放入 37℃ CO2 培养箱中孵育 1~2min（具体以细胞贴壁是否牢固决定时间，当胰酶加入后培养箱内30 秒以后细胞开始逐步脱落的过程中可以移出培养箱至显微镜下观察后续细胞变圆脱落情况，当 90%细胞都脱落后立马终止消化，剩下的10%左右的细胞可以单独处理完换液继续培养有可能也可以生长起来）不要为了所有细胞都脱落而延长消化时间，胰酶损伤比较大；

5)  孵育完成后在倒置显微镜下观察细胞是否变圆飘起，若绝大多数消化下来则直接向培养瓶内加入 2.5- 3倍胰蛋白酶体积的 含 10%FBS 的完全培养基终止，将悬液吸入 15ml 离心管；一定要彻底终止消化，以防含有 EDTA 的胰酶残留，会损伤刺激细胞膜。在以消化下来为前提的情况下，减少胰酶对细胞膜的损伤时间，有助于维持细胞系的状态持续稳定，降低老化速度）

6)   1000rpm 离心 3-5min；

7)  准备两个新的 T-25 培养瓶，各加入 5 - 8 ml 完全培养基（大多数细胞每天消耗的培养基量在4-5ml上下，但是我们建议7-8ml，目的是为了避免培养环境异常误差等因素可能对培养基有影响，多加入的培养基会有缓冲作用）。

8)  离心完成后，弃上清，用 1 ml 完全培养基重悬细胞沉淀，将重悬后的细胞转入 2 个 T-25 培养瓶中；

9)   水平放置培养瓶，混匀后，将培养瓶置于37℃ , 5%CO2 培养箱中静置培养，贴壁困难或者贴壁慢的细胞尤其注意前2-12小时阶段避免晃动导致堆集无法贴壁。

注意：

a)    每次消化不超过 2min（可以每隔0.5-1 min观察一次） ，如果消化 2min后，培养瓶中还有较多细胞贴壁，可采用分步消化，将消化下来的细胞移入 15mL 离心管中和，再向培养瓶中加入胰酶继续消化，每次消化不超过 2min ，直到完全消化下来为止。

b)   细胞传代建议 1 传 2，前期传代后冻存一份细胞，另外一份细胞继续扩增，确保细胞种子保留好之后可以扩大传代比例。

c)    特殊细胞贴壁特别牢固的也可以采用长时间消化法或者物理细胞铲（刮）把细胞消化或者刮下来，比如巨噬类细胞。

d)   有一些细胞属于半贴壁生长，收货后一部分贴壁，还有一部分悬浮的情况下，注意不要把悬浮的细胞全部抽掉不要，或许还是活细胞，应该根据密度数量情况决定是否需要收集起来和贴壁一起重新铺瓶。

冻存（细胞冻存建议每瓶 T25 冻一支）

1)    将需要冻存的细胞从 CO2 培养箱中取出，在生物安全柜内，打开培养瓶瓶口，吸弃瓶内的培养基；

2)     向培养内加入无菌 1×PBS 3ml 之后水平放置培养瓶，旋转培养瓶，使 PBS 能够浸润到培养平面上所有的面积，吸弃 PBS；

3)    向瓶内加入消化液 1 ml ，轻微晃匀后放入 37℃ CO2 培养箱中孵育 ；

4)    孵育完成后在倒置显微镜下观察细胞是否变圆飘起，如还有部分细胞未消化下来，可在生物安全柜内用移液管或者枪头吸起消化液，轻柔吹打培养瓶底面；（备注：不同细胞消化时间不同，根据实际情况而定，可以每30秒-60秒观察一次。）

5)     向消化后细胞的培养瓶中加入 3ml-5ml 含 10%血清的完全培养基终止消化，然后将培养瓶中的液体转入 15ml离心管中，300g 离心 5min；

6)    离心完成后，弃上清，用 1mL 非程序冻存液重悬细胞沉淀，然后转入 1.8ml -2ml冻存管中；

7)    将冻存管转入-80℃冰箱中过夜；

8)    第二天从-80℃冰箱中，取出冻存管，尽快转入液氮罐中保存。